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间接血凝试验:是以红细胞为载体的间接凝集试验,即用已知的抗原(或抗体)致敏红细胞,与标本中相应的抗体(或抗原)特异结合,出现红细胞凝集现象。
胶乳凝集抑制试验(LAT):将抗原(或抗体)致敏胶乳颗粒,直接与待检标本中的抗体(或抗原)发生凝集反应。(常用的载体颗粒为聚苯乙烯胶乳)
直接coombs试验:将抗人球蛋白试剂直接加到表面结合抗体的受检红细胞中,即可见细胞凝集。用于检测吸附于红细胞表面的不完全抗体。(如HDN、AIHA)
间接coombs试验:将受检血清和具有相应抗原性的红细胞相结合,再加入抗人球蛋白抗体即可出现可见的红细胞凝集。用于检测血清中游离的不完全抗体。
沉淀反应(precipitation reaction):是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。
免疫浊度测定:是应用抗原抗体结合在液体中形成的免疫复合物干扰光线可用仪器检测的特点,将现代光学测量仪器与自动分析检测系统相结合应用于沉淀反应,对各种液体介质中的微量抗原、抗体和药物及其他小分子半抗原物质进行定量测定的技术。
钩状效应(high dose hook effect):免疫浊度测定,抗原过量导致形成的免疫复合物(IC)分子小,发生再解离,浊度下降,光散射减少。
单向免疫扩散实验:是先将一定量的抗体混于琼脂凝胶中,使待测的抗原溶液在琼脂内由局部向周围自由扩散,在一定区域内形成可见的沉淀环。环的直径或面积的大小与抗原含量正相关。常用于IgG/A/M、补体 C3/C4等血浆蛋白的测定。
双向免疫扩散试验:是将抗原核抗体加在同一琼脂板的对应孔中,各自向对方扩散,在浓度比例恰当处形成沉淀线。①沉淀线靠近抗原孔,说明抗体浓度较大;靠近抗体孔则说明抗原浓度大。②形成的沉淀线弯向分子量大的一方。③(待测物为两种抗原)两条沉淀线互相吻合相连,两抗原中存在相同表位;两条沉淀线交叉,说明两抗原完全不同;两条沉淀线相切,提示两抗原之间有部分相同。
对流免疫电泳(CIEP):实质上是双扩和电泳的结合。在pH8.6的碱性缓冲液琼脂中进行电泳,分子量小、等电点低、带有较多负电荷的Ag泳向阳极,而Ab球蛋白等电点偏高(约为6--7),在pH8.6时带负电荷较少,加上分子量较大,泳动慢,受电渗(指电场中液体对固体支持物的相对移动)干扰后向阴极倒退,这样抗原抗体作相对运动,在较短时间内即可相遇,在孔间两者分子比例合适的地方形成沉淀线。(抗原加在-级,抗体加在+级)
抗原浓度越高,沉淀线越接近抗体孔,甚至超过抗体孔。本法简便快速,灵敏度是双扩的8~16倍,可检出蛋白质浓度达μg/ml,常用于Ag/Ab的性质/效价/纯度测定。
火箭免疫电泳(RIE):实质上是单扩和电泳的结合。是将抗体混合于琼脂中,电泳时,抗体不移动,抗原由负极向正极移动,并随抗原浓度的下降,抗原泳动的基底区也逐渐变窄,抗原抗体免疫复合物形成的沉淀西安也越来越窄,形成一个火箭状的不溶性复合物沉淀峰。
抗体浓度一定时,沉淀峰的高度与抗原量呈正相关。其灵敏度可达ng/ml,常用于IgA/G等蛋白定量。
免疫电泳(IEP):将待测标本(蛋白质抗原)置于琼脂凝胶中电泳,样品中各蛋白成分因所带电荷、分子量及构型不同,被分成肉眼不可见的若干区带。然后沿与电泳方向开一平行的抗体槽并加入抗血清,置室温或37度使两者扩散。18-24h后,各区带蛋白与相应的Ab在相应的位置上形成弧形沉淀线。Ag越多,沉淀线越靠近Ab槽,其沉淀线越粗,可做细微的蛋白质组分分析,仅为定性实验。
免疫固定电泳(IFE):实质是区带电泳和沉淀反应相结合。先将血清蛋白质置于琼脂凝胶中进行区带电泳分离,再将固定剂和各型免疫球蛋白及轻链抗血清加于凝胶表面的泳道上,经过孵育,固定剂和抗血清在凝胶内渗透、扩散,抗原抗体直接发生沉淀反应,洗脱游离的抗体,形成的抗原抗体复合物则保留在凝胶中。经氨基黑,参考泳道和抗原抗体沉淀区被着色,根据电泳移动距离分离单克隆组分,可对各类Ig及其轻链进行分型。最常用于M蛋白的鉴定。
荧光免疫技术:是将抗原抗体反应与荧光技术相结合而建立的一种免疫荧光技术,具有高度特异性、敏感性和直观性。
荧光抗体技术(FAT):以荧光素标记抗体对抗原进行定位染色,并借助荧光显微镜观察标本片上荧光染色的形态,从而判断是否存在待测抗原,这种技术就是~。
荧光抗体染色方法:直接法(简便快速特异性强,但敏感性不如间接法,一种荧光抗体只能检测一种抗原)、间接法(敏感性比直接法高5~10倍,一种荧光二抗可检测多种抗原/抗体,但容易产生非特异性荧光)、双标记法(用于检测同一标本中的两种抗原)
荧光:荧光物质吸收激发光的能量后,使原来处于基态的电子跃迁到激发态,当其回复至基态时,激发态的电子以发射光的形式释放出能量,这种发射光称为荧光。
①发射光谱:是指固定激发光波长,在不同波长下所记录到的样品发射荧光的谱图
②激发光谱:是指固定检测发射光(荧光)波长,用不同波长的激发光照射样品得到的荧光的谱图。
③荧光效率:是指荧光分子将吸收的光能转变成荧光的百分率,与发射荧光光量子的数值成正比。
④荧光效率=发射荧光的光量分子数(荧光强度)/吸收光的光量子数(激发光强度)
⑤荧光猝灭:荧光分子的辐射能力在受到激发光较长时间的照射后会减弱的现象。
只有那些能产生明显荧光的有机化合物才能作为荧光色素。
时间分辨荧光免疫测定(TRFIA):是以镧系元素标记抗原或抗体,并与时间分辨测定技术相结合而建立起来的一种新型非放射性微量分析技术。它具有灵敏度高、发光稳定、荧光寿命长、自然荧光干扰少、标准曲线范围宽等优点。
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