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脑脊液的细胞学检查,因检测目的不同选用不同的染色方法。
1.[单选题]检查肿瘤细胞可选用
A.苏丹Ⅲ染色
B.过氧化物染色
C.吖啶橙荧光染色
D.高碘酸-雪夫染色
E.硝基四氮唑蓝染色
参考答案:C
2.[单选题]鉴别腺癌细胞和原始淋巴细胞可选用
A.苏丹Ⅲ染色
B.过氧化物染色
C.吖啶橙荧光染色
D.高碘酸-雪夫染色
E.硝基四氮唑蓝染色
参考答案:D
【知识点介绍一】:吖啶橙荧光染色法
【实验原理】
吖啶橙(acridine orange,AO)是最经典的极灵敏的荧光染料,它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光。其激发峰为492nm,荧光发射峰为530nm(DNA)、640(RNA),它与双链DNA的结合方式是嵌入双链之间,而与单链DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上。在蓝光(502nm)激发下,细胞核发亮绿色荧光(约530nm),核仁和胞质RNA发橘红色荧光(>580nm)。吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光,但细胞固定阻抑了这种结合,从而主要显示DNA、RNA两种核酸。
【实验用品】
1、 器材
荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。
2、 试剂
(1)0.1mol/l pH7.0 PBS液
A液:NaH2PO4·H2O 2.76g,加蒸馏水至100ml;
B液:Na2HPO4·7H2O 5.36g,加蒸馏水至100ml;
取A液16.5ml+B液33.5ml+NaCl 8.5g,用蒸馏水稀释至100ml。
(2)1%吖啶橙原液取0.1g吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml(临用时配制0.01%吖啶橙染液:将1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS溶液稀释10倍)。
3、 材料
口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌BEL-7402细胞爬片。
(1)取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上。
(2)95%乙醇溶液固定5min。
(3)滴加0.01%吖啶橙染液5min。
(4)盖上盖玻片,吸水纸吸去盖玻片周围多余液体,镜下观察。
【结果与观察】
荧光显微镜下(选用蓝色激发滤片),可见含DNA的细胞核显示黄绿色荧光,含RNA的细胞质及核仁显示橘红色荧光体外培养的肝癌细胞吖啶橙荧光染色
【注意事项】
(1)制片后一定要晾干玻片,在进行后续步骤,否则会导致细胞脱落。
(2)每种荧光染料,均有自己的最适pH,此时荧光最强。当pH改变时,不仅荧光强度减弱,而且波长将有所改变,因此荧光检测时要在一定的pH缓冲液中进行。
【知识点介绍二】:高碘酸-雪夫染色
高碘酸雪夫法(PAS)染色是一种特别有用的技术,国外有的著名实验室甚至作为标准染色以替代苏木精和伊红(HK)染色。PAS染色可显示糖原、中性黏液物质、基底膜、霉菌与寄生虫。例如,PAS染色可将组织中的黏多糖类物质染成樱桃桃红色,从而判定肿瘤细胞足否分泌糖原,并推断肿瘤细胞的起源及肿瘤细胞是否发生血管没润。因此,PAS染色在病理诊断中起若十分重要的作用。但是PAS试剂通常难以配制,染色结果受诸多闪素的影响。
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